用于测量胞内CAMP的新型膜电位敏感染料

       G蛋白偶联受体(GPCRs)和下游的信号传导通路控制着多种细胞内活动和生理进程，GPCRs的功能障碍将引起许多病理性变化。GPCRs激动剂和拮抗剂被广泛用于研究疾病治疗的新药。目前和GPCRs相关的研究和药物发掘均需要对GPCRs进行高通量和高内容的筛选分析。 
       目前大约70%的GPCRs信号转导是通过CAMP传导到下游的信号放大级联，因此胞内CAMP水平可以作为GPCRs功能状态的指示剂，目前CAMP测定采用实时记录活细胞内CAMP波动的方法，以突变的环状核苷门控离子通道(CNG)作为CAMP的生物传感器，使得CAMP的改变和跨膜电位或胞内钙离子浓度联系起来。 ANASPEC 研究人员最近通过对以往的金标准(gold standard) 膜电位染料DisBAC2复合物进行化学结构改造研制出一种新的膜电位染料，商品名叫HB021-152，它也是基于带负电的类菁染料(oxonol)，和现有的膜电位染料相比各种特性都得到了提高，使用方式采用”混合读”的格式(mix-and read)的模式，因此适用于GPCRs功能分析和基于GPCRs的药物的高通量筛选。使用HB021-152对CNG转染细胞的GPCRs激活后的膜电位染色分析的结果表明HB021-152 产生的荧光信号增加迅速，能反映胞内CAMP浓度的实时变化。进一步的实验将HB021-152 和DisBAC2 进行比较，结果表明HB021-152具有更强的荧光检测信号，而DisBAC2的动态范围在含血清检测时大幅度减少，而HB021-152不受血清干扰并且无GPCRs激动剂时的基础稳定性也远远超过DisBAC2，因此HB021-152是对GPCRs进行高通量和高内容的筛选分析的有效新工具。